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当前位置: 首页 > 文章 > 结核分枝杆菌Ag85B和ESAT-6基因重组产单核细胞李斯特菌的构建 中国兽医科学 2009,39 (8) 707-711
Position: Home > Articles > Construction of recombinant Listeria monocytogenes expressing Mycobacterium tuberculosis antigens Ag85B and ESAT-6 Chinese Veterinary Science 2009,39 (8) 707-711

结核分枝杆菌Ag85B和ESAT-6基因重组产单核细胞李斯特菌的构建

作  者：
董慧;焦新安;殷月兰;田德斌;潘志明;刘松婷;方丽君
单  位：
扬州大学江苏省人兽共患病学重点实验室
关键词：
结核病;结核分枝杆菌;产单核细胞李斯特菌;同源重组
摘  要：
对编码结核分枝杆菌抗原Ag85B和ESAT-6的基因片段进行了扩增,并将其克隆入穿梭载体pKSV7,利用基因同源重组技术构建了表达结核分枝杆菌抗原Ag85B和ESAT-6的重组产单核细胞李斯特菌(LM)。结果表明,外源基因成功整合入LM基因组并获得转录;Western-blot分析结果显示,重组菌携带的外源基因在动物体内能够表达;溶血试验与细胞感染试验表明,较之野生型李斯特菌,外源基因的插入破坏了重组菌LM(pKSV7-H85-6B)的溶血活性,显著降低了对细胞的侵袭能力。证实,携带结核分枝杆菌保护性抗原Ag85B和ESAT-6的重组李斯特菌对结核病新型疫苗的研究具有潜在应用价值。
译  名：
Construction of recombinant Listeria monocytogenes expressing Mycobacterium tuberculosis antigens Ag85B and ESAT-6
作  者：
DONG Hui,JIAO Xin-an,YIN Yue-lan,TIAN De-bin,PAN Zhi-ming,LIU Song-ting,FANG Li-jun(Jiangsu Key Laboratory of Zoonosis/Yangzhou University,Yangzhou 225009,China)
关键词：
tuberculosis;Mycobacterium tuberculosis;Listeria monocytogenes;homologous recombination
摘  要：
The genes encoding Ag85B and ESAT-6 antigens of Mycobacterium tuberculosis were amplified and cloned into shuttle plasmid pKSV7.By using homologous recombination technique,a recombinant Listeria monocytogenes strain LM-4(pKSV7-H85-6B)expressing Ag85B and ESAT-6 was constructed.The results of PCR confirmed that the heterologous genes were inserted into the genome of L.monocytogenes.RT-PCR results showed that foreign genes were transcribed normally.Western-blot analysis confirmed that these two genes were successfully expressed in mice after vaccination.Compared with the wild type bacte-ria,the hemolytic activity of LM(pKSV7-H85-6B) was dramatically decreased,and the recombinant strain showed the reduced invasiveness to the CaCo-2 cells.All these results showed that LM(pKSV7-H85-6B) had the potential practical value in the research of new vaccines against tuberculosis.

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