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HA基因真核表达载体构建及在293T细胞中的表达

作者：

李方琳;王慧慧;粟雨芯;马忠仁

单位：

西北民族大学生物医学研究中心

关键词：

血凝素(HA);质粒构建;真核表达;DNA疫苗

摘要：

目的:为后续进一步研究H1N1病毒DNA疫苗对小鼠免疫系统的影响提供技术支撑.方法:应用PCR方法体外扩增血凝素(HA)基因全序列,并利用pcDNA3.1(+)载体构建甲型流感病毒(H1N1)血凝素(HA)的真核表达质粒(pcDNA3.1(+)-HA),经双酶切鉴定后,转染293T细胞,通过RT-PCR和Western blot方法观察该重组质粒在293T细胞中的表达情况.结果表明,pcDNA3.1(+)-HA重组质粒构建成功;与空白及阴性对照相比,转染293T细胞48 h后的HA mRNA水平显著上升(2.4×103,P<0.0001),并能在293T细胞中成功表达,为深入研究H1N1病毒DNA疫苗对小鼠免疫系统的影响奠定了基础.

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