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不同MDCK单克隆细胞株对H5亚型禽流感病毒增殖条件和放大工艺的研究

作  者:
方琳;朱辉;黄皓源;彭思力;覃海康;梁昭平
单  位:
广州市华南农大生物药品有限公司
关键词:
H5亚型禽流感病毒;MDCK单克隆细胞株;无血清全悬浮培养;接毒量;收获时间
摘  要:
为了解H5亚型禽流感病毒rFJ56株在MDCK全悬浮细胞上的增殖规律,确定100 L生物反应器工艺的最适接毒量和收获时间,对H5亚型禽流感病毒rFJ56株敏感的MDCK全悬浮细胞进行单克隆筛选和全悬浮驯化,筛选出对该毒株最敏感的MDCK单克隆细胞株;在摇瓶工艺的基础上,将该细胞在100 L生物反应器中接种H5亚型禽流感病毒rFJ56株,检测接种后不同时间病毒HA效价和病毒滴度(EID50),确定最适接毒量和收获时间.共筛选出22株MDCK全悬浮细胞单克隆细胞株,其中5株对H5亚型禽流感病毒rFJ56株最敏感,接种后病毒HA效价均可达到9 log2;对MDCK单克隆细胞株按0.01%体积比接种H5亚型禽流感病毒rFJ56株,在100 L生物反应器中培养60 h,HA效价可达10 log2,病毒含量可达108.17EID50/0.1 mL,可为H5亚型禽流感病毒无血清全悬浮培养放大工艺提供参考.

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