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Position: Home > Articles > Establishment of the duplex PCR assay based on ITR-059 gene for the detection of goatpox virus and orf virus Chinese Veterinary Science 2017 (5) 569-576

山羊痘病毒及口疮病毒ITR-059基因双重PCR检测方法的建立

作  者：
赵文华;杨仕标;姚俊;李富祥
单  位：
云南省畜牧兽医科学院云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室
关键词：
山羊痘病毒;口疮病毒;二联;普通PCR;实时PCR;探针
摘  要：
为实现山羊痘病毒(GTPV)和口疮病毒(ORFV)的同步快速检测,基于GTPV的ITR基因及ORFV的059基因,分别设计用于普通双重PCR的引物2对、用于二联实时荧光定量PCR的特异性引物及探针2套;探针分别用5′JOE-Eclipse3′及5′FAM-TAMRA3′荧光染料标记物进行标记。结果显示,所建立的GTPV-ITR-L-ORFV-059双重普通PCR方法,可实现对GTPV与ORFV的特异性双重检测,检测敏感度可达10~4copies/μL DNA;所建立的ITR-059二联探针实时荧光定量PCR方法可同时特异性检测ORFV和GTPV产生特异性荧光信号,二联探针的检测敏感度可分别达10~(2.87)和10~(2.52) copies/μL DNA。本研究初步建立了可同步特异性检测GTPV和ORFV的双重普通PCR及二联探针实时荧光定量PCR检测方法。
译  名：
Establishment of the duplex PCR assay based on ITR-059 gene for the detection of goatpox virus and orf virus
作  者：
ZHAO Wen-hua;YANG Shi-biao;YAO Jun;LI Fu-xiang;Yunnan Tropical and Subtropical Animal Viral Disease Laboratory/Yunnan Academy of Animal Husbandry and Veterinary Medicine;
关键词：
goatpox virus(GTPV);;orf virus(ORFV);;duplex;;routine PCR;;real-time PCR;;probe
摘  要：
To detect the goatpox virus(GTPV) and orf virus(ORFV) simultaneously and quickly,two pairs of primers for routine PCR assay,and two pairs of primers and relative probes for real-time PCR assay were designed based on the inverted terminal repeat(ITR) segment of GTPV and the 059 gene of ORFV,respectively.The probes were labeled with different fluorescent materials 5′JOE-Eclipse3′ and5′FAM-TAMRA3′,respectively.The results showed that the developed GTPV-ITR-L-ORFV-059 duplex routine PCR assay was specific for GTPV and ORFV with the detection sensitivity of 10~4copies/μL DNA.The established duplex ITR-059 probe real-time PCR assay was also proved specific for ORFV and GTPV,and the fluorescent signal could be detected with a detection limit of 10~(2.87)copies/μL DNA and 10~(2.52)copies/μL DNA for GTPV and ORFV,respectively.Finally,in the study the duplex routine PCR and the duplex real-time PCR assays for simultaneous detection of GTPV and ORFV were established preliminarily.

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