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当前位置: 首页 > 文章 > 鸭甲型肝炎病毒1型与3型双重TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立与应用 畜牧兽医学报 2021 (11) 3149-3156
Position: Home > Articles > 鸭甲型肝炎病毒1型与3型双重TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立与应用 Chinese Journal of Animal and Veterinary Sciences 2021 (11) 3149-3156

鸭甲型肝炎病毒1型与3型双重TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立与应用

作  者：
林梦舟;吴双;徐建生;谢军;吴植;姜勇;朱善元
单  位：
扬州大学兽医学院;江苏农牧科技职业学院江苏省兽用生物制药高技术研究重点实验室;江苏立华牧业股份有限公司
关键词：
1型鸭肝炎病毒;3型鸭肝炎病毒;鸭病毒性肝炎;实时荧光定量PCR;
摘  要：
旨在建立一种针对鸭甲肝病毒1型（DHAV-1）和鸭甲肝病毒3型（DHAV-3）的高效快速、高灵敏度和高特异性的双重TaqMan实时荧光定量PCR（q-PCR）检测方法并应用于临床疑似样品检测。根据DHAV-1和DHAV-3的VP1基因保守区域,分别设计合成了2对特异性引物和探针,在此基础上建立并优化了双重TaqMan实时荧光定量PCR方法。结果显示:优化后标准曲线的相关系数（R2）均在0.999以上,扩增效率（E）在105%～110%,其组内变异系数（i-CV）与组间变异系数（c-CV）均在0.77%以下。运用双重q-PCR方法对不同稀释度的混合质粒与病毒核酸进行检测,结果表明,建立的双重TaqMan q-PCR特异性高;同时检测DHAV-1和DHAV-3的灵敏度均可达10个拷贝,分别是常规PCR方法的1 000倍和100倍。对40份来自苏中、苏北地区的疑似鸭肝炎病毒感染的鸭组织病料进行检测,结果表明,q-PCR方法检出36份阳性病料,阳性率为90%;而常规PCR方法未能检出高Ct值的样品,阳性率为72.5%（29份阳性病料）。建立的双重TaqManq-PCR检测方法为DHAV-1与DHAV-3的临床样品检测提供了高效、灵敏、特异的工具,推动了临床分子流行病学调查及病毒定量分析等研究。

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