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基于P18蛋白基因的新型鸭呼肠孤病毒荧光定量RT-PCR检测方法的建立

作  者:
沈丽雅;潘群兴;卢凤英;董永毅;张敬峰;吴坤;刘青涛;姜平;张小飞
单  位:
江苏省农业科学院兽医研究所;南京农业大学动物医学院;江苏省动物疫病预防控制中心
关键词:
新型鸭呼肠孤病毒;P18蛋白基因;荧光定量RT-PCR;
摘  要:
根据新型鸭呼肠孤病毒(Novel duck reovirus, NDRV)特有的非结构蛋白P18基因保守序列设计1对特异性引物,建立了NDRV荧光定量RT-PCR检测方法。用该方法和普通RT-PCR方法对239份临床样品进行检测,NDRV阳性检出率分别为23.85%(57/239)和17.57%(42/239),荧光定量RT-PCR检测方法的检出率明显高于普通RT-PCR检测方法。随机取5份荧光定量RT-PCR检测方法检测的阳性的样品用鸭胚进行病毒分离培养,经普通RT-PCR扩增和基因测序证明均为NDRV。用103.0ELD50剂量的NDRV-SY株人工感染14日龄雏鸭,不同时间采集泄殖腔肛拭子样品,通过荧光定量RT-PCR检测方法进行排毒情况监测,结果显示,雏鸭人工感染NDRV 48 h时可以从泄殖腔检测到病毒排出,持续时间可达20 d,并发现在病毒感染后的第5 d和第10 d出现2次排毒高峰。试验结果表明,建立的NDRV荧光定量RT-PCR检测方法具有良好的特异性和较高的敏感性,可用于NDRV感染的排毒监测以及临床感染的早期诊断和流行病学调查。

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