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基于异源包被诺氟沙星间接竞争酶联免疫分析方法

作  者:
陆宁;张慧敏;邢爽;丁德杰;陈鑫;高瑾;张潮;蒲顺昌
单  位:
亳州学院生物与食品工程系
关键词:
诺氟沙星;异源包被;间接竞争ELISA法;
摘  要:
目的:建立诺氟沙星的间接竞争酶联免疫分析方法。方法:采用活泼酯法将诺氟沙星与牛血清蛋白偶联制备免疫原,与鸡卵清蛋白偶联制备包被原;采用活泼酯法将氧氟沙星与鸡卵清蛋白偶联制备包被原;用紫外吸收光谱法扫描鉴定以上人工抗原是否偶联成功。将免疫原通过动物免疫获得诺氟沙星抗体,利用间接竞争酶联免疫分析方法确定最佳包被原、抗体和包被原的最佳工作浓度,优化二抗浓度、反应时间,并对方法特异性和准确度进行评价。结果:选用氧氟沙星包被原时灵敏度较高,当氧氟沙星包被原浓度为125 ng/mL,抗体稀释倍数为500倍,二抗稀释倍数为5 000倍,反应时间为30 min时,对诺氟沙星的识别灵敏度最高,半抑制浓度IC50为4.23 ng/mL,定量检测线性范围(IC20~IC80)为0.29~61.83 ng/mL,检测限IC10为0.06 ng/mL。对诺氟沙星及其他4种常见氟喹诺酮类物质交叉反应率大于5%,实际样品添加回收率范围在70%~95%之间。结论:该检测方法具有较强的广谱性及较高的灵敏度,可以快速检测鱼肉及蜂蜜中的诺氟沙星及其他4种常见氟喹诺酮类物质总量。

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