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向日葵黑茎病菌RPA/CRISPR-Cas12a快速检测方法的建立

作  者:
邝瑞瑞;雷荣;江丽;段维军;李雪莲;符娜;范在丰;李远;吴品珊
单  位:
中国检验检疫科学研究院;伊犁师范大学;重庆医科大学永川附属医院;中国农业大学农学与生物技术学院;宁波检验检疫科学技术研究院
关键词:
向日葵黑茎病菌;RPA;CRISPR-Cas12a;荧光检测;侧向流层析试纸条
摘  要:
向日葵黑茎病菌是向日葵上的一种毁灭性真菌,是我国的植物检疫性有害生物。为了准确快速检测向日葵黑茎病菌,本研究根据向日葵黑茎病菌及其近似种的ITS序列差异,设计特异性RPA引物和CRISPR-Cas12a crRNA,建立了RPA等温扩增技术结合CRISPR-Cas12a检测的快速检测方法。通过条件优化,RPA/CRISPR-Cas12a检测体系在37℃恒温条件下,RPA反应30 min, CRISPR/Cas12a反应20 min,即可特异性检测向日葵黑茎病菌。荧光法检测灵敏度与实时荧光PCR的灵敏度相当,最低检测量为0.1 pg,试纸条法检测最低检测量为1 pg。由于试纸条检测结果可用肉眼观察,快速便携,操作简单,更适合用于田间和口岸的向日葵黑茎病菌快速早期检测;而荧光检测灵敏度高,对环境要求高,更适合用于实验室检测。

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