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Heilongjiang Animal Science and Veterinary Medicine
2021
(12)
127-131
鲤疱疹病毒Ⅱ型套式PCR检测方法的建立
作 者：
安伟;张明辉;彭军辉
单 位：
上海市水产研究所
关键词：
鲫造血器官坏死病;鲤疱疹病毒Ⅱ型（CyHV-2）;鲫鱼;检测方法;套式PCR;
摘 要：
为了快速准确检测引发鲫造血器官坏死病的鲤疱疹病毒Ⅱ型（CyHV-2）,试验根据GenBank中发表的CyHV-2解旋酶基因序列设计2对特异性引物,对PCR退火温度进行优化,建立了CyHV-2套式PCR检测方法,对引物的特异性和敏感性进行检验,并利用该方法对138份鲫鱼临床样品进行了检测。结果表明:试验建立的套式PCR检测方法第1轮和第2轮的最佳退火温度分别为55℃和59℃;该方法能特异性地扩增出515 bp和277 bp的CyHV-2解旋酶基因片段,且对草鱼呼肠孤病毒（GCRV）、鲤春病毒血症病毒（SVCV）、对虾白斑病毒（WSSV）、对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒（IHHNV）和虾虹彩病毒（SHIV）均不能扩增出任何片段;对CyHV-2的检测灵敏度为常规PCR方法的100～1 000倍;临床样品检测结果显示符合率为100%。说明建立的套式PCR方法具有极高的特异性和灵敏性,可用于CyHV-2急性感染和隐性感染的早期诊断。
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