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桃蛀螟性信息素结合蛋白CpunPBP3的表达模式及性信息素结合特性(英文)

作  者:
陈秋应;杨喜;游东蕊;杨沐;徐志峰;肖伟
单  位:
西南大学植物保护学院昆虫学及害虫控制工程重点实验室
关键词:
桃蛀螟;性信息素结合蛋白;表达模式;昼夜节律;原核表达;荧光竞争结合实验;
摘  要:
【目的】本研究旨在对桃蛀螟Conogethes20punctiferalis性信息素结合蛋白Cpun20PBP3进行鉴定和定性分析,完善对桃蛀螟性信息素感受机制的理解。【方法】扩增、分析桃蛀螟Cpun20PBP3的c20DNA序列,并与其他草螟科昆虫的同源蛋白氨基酸序列进行比较。利用qRT-PCR测定桃蛀螟不同日龄雄成虫触角中Cpun20PBP3的表达量变化,以及该基因表达的昼夜波动;以性信息素反-10-十六碳烯醛(E10-16∶Ald)(15020ng)和顺-10-十六碳烯醛(Z10-16∶Ald)(620ng)对雄成虫进行诱导,并检测诱导后2420h内不同时间节点时触角中Cpun20PBP3的表达量。构建重组表达载体p20ET-30a(+)/Cpun20PBP3,通过大肠杆菌Escherichia20coli表达获得重组蛋白,并通过荧光竞争实验检测纯化重组蛋白Cpun20PBP3与上述2种性信息素成分的结合能力。【结果】系统发育分析结果显示,Cpun20PBP3与已经鉴定的桃蛀螟PBP基因Cpun20PBP2和Cpun20PBP5分布在不同分支中,但与其他昆虫物种的PBP基因亲缘关系较近;20qRT-PCR结果表明,雄成虫触角中Cpun20PBP3的表达量在羽化后0-820d呈先升高后下降的趋势,2420h光周期内17∶00时的表达量显著高于1∶00时的,其余时间节点间的表达量无显著差异;2015020ng的E10-16∶Ald诱导3和620h后的表达量显著下降,620ng的Z10-16∶Ald诱导6和2420h后的表达量显著增加。荧光竞争结合实验结果表明,Cpun20PBP3重组蛋白与性信息素E10-16∶Ald和Z10-16∶Ald均有强结合能力,Ki值分别为9.267和8.656μmol/L。【结论】本研究明确了Cpun20PBP3的核苷酸和氨基酸序列及其表达模式,能够响应性信息素的诱导而表达,而且Cpun20PBP3重组蛋白能够很好地结合性信息素,表明Cpun20PBP3是桃蛀螟的一条性信息素结合蛋白。

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