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丝状支原体山羊亚种LppA蛋白N末端基因真核表达载体构建及小鼠免疫效果分析

作  者:
尹德晶;吴燕;岳筠;杨鹏;陈静;王慧;张双翔;王开功;程振涛
单  位:
贵州省动物疫病预防控制中心;贵州大学动物科学学院
关键词:
丝状支原体山羊亚种;LppA蛋白;DNA疫苗;免疫效果
摘  要:
基于丝状支原体山羊亚种(Mycoplasma mycoides subsp.capri,Mmc)贵州株的LppA蛋白N末端基因,构建真核重组表达质粒pVAX1-LppA,并对免疫效果进行分析,为防控羊支原体肺炎提供新思路.以构建的真核重组表达质粒pVAX1-LppA(50、100、150 μg)、pVAX1空载体、无菌PBS分别免疫小鼠.通过ELISA方法检测小鼠血清中抗体和细胞因子(IL-2、IFN-γ、IL-4)水平,MTT法检测脾淋巴细胞增殖情况,流式细胞术检测CD4+、CD8+T淋巴细胞占总细胞数比例的变化,攻毒试验评估对小鼠的保护效率,并采集小鼠肺制备切片以观察病理变化.结果显示:与空载体pVAX1组及PBS对照组相比,重组质粒pVAX1-LppA组小鼠体内的抗体和细胞因子(IL-2、IFN-γ、IL-4)水平显著升高,脾细胞增殖能力更强,CD4+、CD8+T淋巴细胞占总细胞数的比例显著增多,对小鼠具有一定的攻毒保护能力,肺部病理损伤明显减轻,发病动物数量减少,其中100μg的重组质粒pVAX1-Lp-pA保护率最高,为80%.综上表明,LppA蛋白具有良好的免疫原性,重组质粒pVAX1-LppA能激活强烈的体液免疫和细胞免疫应答,可作为羊支原体肺炎的候选疫苗.
译  名:
Construction of Eukaryotic Expression Vector of N-terminal Gene of LppA Protein of Mycoplasma Mycoides subsp.Capri and Analysis of Its Immune Efficacy in Mice

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