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信号肽酶复合体催化亚基SPC18敲除细胞系的建立与鉴定

作  者:
张子豪;李慧;刘萌;曹涵钰;董宁征
单  位:
江苏省血液研究所唐仲英血液学研究中心;江苏省血液研究所
关键词:
乳腺生物反应器;信号肽酶复合体;催化亚基SPC18;CRISPR-Cas9;HEK293
摘  要:
信号肽酶复合体(SPC)通过水解切除信号肽调控蛋白分泌,实验旨在研究信号肽酶复合体催化亚基SPC18对细胞行为、蛋白分泌功能的影响,探究其在乳腺生物反应器中的应用.本研究在人胚肾细胞HEK293细胞中,采用CRISPR-Cas9基因编辑技术使SPC18的2号外显子缺失碱基GGAAG,导致移码突变,建立SPC18敲除细胞系,检测SPC18缺失对细胞形态、细胞增殖和内源分泌蛋白基质金属蛋白酶9(MMP9)表达和分泌的影响.靶基因测序及SPC18蛋白检测显示,成功构建了SPC18敲除细胞系,细胞形态与野生型HEK293细胞无显著差异,但细胞增殖能力显著下降;SPC18缺失不影响内源性MMP9的表达,但蛋白分泌受到抑制.本研究建立了SPC18敲除细胞系,SPC 18的缺失会影响SPC功能,为SPC在乳腺生物反应器中的应用提供了依据.

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