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当前位置: 首页 > 文章 > 寒兰基因组DNA ISSR-PCR反应条件的优化 安徽农业科学 2009,37 (29) 14044-14046+14050
Position: Home > Articles > Optimization of ISSR-PCR Reaction Conditions for Genomic DNA from Cymbidium kanran Makino Journal of Anhui Agricultural Sciences 2009,37 (29) 14044-14046+14050

寒兰基因组DNA ISSR-PCR反应条件的优化

作  者：
孙小琴;李恩香;贾文杰;彭德镇;孔令杰;杨柏云
单  位：
南昌大学生命科学学院
关键词：
寒兰;ISSR-PCR反应;遗传多样性
摘  要：
以改良的CTAB法提取的寒兰(Cymbidium kanran Makino)基因组DNA为模板,通过单因子试验建立最适的寒兰的ISSR-PCR反应体系。结果表明,适宜寒兰ISSR-PCR反应体系的扩增条件为:25μlPCR反应体积中,1×PCR buffer,2.0 mmol/LMgCl2,300 ng模板DNA,200μmol/LdNTP,1.40 UTaqDNA聚合酶,0.4μmol/L引物。最佳扩增程序为:94℃预变性5min,然后进行40个循环:94℃变性30s,复性温度根据各引物的Tm值略低1~2℃,30 s,72℃延伸50s,循环结束后72℃延伸7min。
译  名：
Optimization of ISSR-PCR Reaction Conditions for Genomic DNA from Cymbidium kanran Makino
作  者：
SUN Xiao-qin et al (School of Life Science,Nanchang University,Nanchang,Jiangxi 330031)
关键词：
Cymbidium kanran;ISSR-PCR reaction;Genetic diversity
摘  要：
The genomic DNA of C.kanran was used as template,which was extracted by improved CTAB.The suitable reaction ISSR-PCR system of C.kanran was established by studying the influence of the main components in the ISSR reaction system.The most suitable ISSR-PCR reaction system and amplified procedure for C.kanran was 25 μl amplification reactions system which contained 1×PCR buffer,2.0 mmol/L MgCl2,300 ng template DNA,200 μmol/L dNTPs,1.40 U Taq DNA polymerase,0.4 μmol/L primer.The optimal amplified procedure was as follows: a pre-denaturing for 5 min at 94 ℃,40 cycles of denaturing for 30 s at 94 ℃,annealing for 30 s at the temperature due to 1-2 ℃ lower than the Tm of different primer and extension for 50 s at 72 ℃.At last,the DNA in the reactions system was extended for 7 min at 72 ℃.

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