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BTV和PPRV双重荧光定量RT-PCR检测方法的建立

作  者:
勾倩倩;杜吉革;李启红;李倩琳;赵洋;钱莺娟;印春生;郑龙三
单  位:
南京农业大学动物医学院;中国兽医药品监察所
关键词:
蓝舌病病毒;小反刍兽疫病毒;双重荧光定量RT-PCR
摘  要:
为建立一种能够同时检测蓝舌病病毒(BTV)和小反刍兽疫病毒(PPRV)的快速检测方法,本研究选取蓝舌病病毒的NS3基因和小反刍兽疫病毒的N基因作为靶基因,参照GenBank上公布的两种基因序列,通过序列比对后选取一段保守性较高的区域,利用Beacon designer 8设计引物和探针并优化反应体系及反应条件,建立了双重荧光定量RT-PCR检测方法.结果显示,该方法检测BTV和PPRV阳性质粒标准品的最低检出量分别为1.7 copies/μL和1.2 copeis/μL;与山羊痘病毒、羊口疮病毒、口蹄疫病毒、羊腐败性梭菌、布氏杆菌及弓形虫无交叉反应,具有良好的特异性;其组间重复性和组内重复性的变异系数均小于2%,表明该方法具有较好的重复性.结果表明,建立的双重荧光定量RT-PCR检测方法适用于BTV和PPRV的快速检测.
译  名:
Establishment of duplex TaqMan real-time RT-PCR for detection of BTV and PPRV

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