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猪伪狂犬病病毒野毒LNA探针real-time PCR检测方法的建立

作  者:
李艳;楚品品;雷雯;勾红潮;蒋智勇;蔡汝健;宋帅;卞志标;杨东霞;李春玲
单  位:
广东省妇幼保健院;广东省农业科学院动物卫生研究所
关键词:
猪伪狂犬病病毒;gE基因;LNA探针;实时荧光定量PCR;
摘  要:
本研究根据猪伪狂犬病病毒gE基因保守区域设计特异性引物和LNA-TaqMan探针,建立了基于LNA-TaqMan探针的猪伪狂犬病病毒野毒株荧光定量PCR检测方法。结果显示:所建立的方法能够特异性的检测出猪伪狂犬病病毒野毒株;灵敏度更高,最低检测下限为10个拷贝/μL;批内变异系数和批间变异系数分别为0.43%~0.64%、0.44%~2.34%,重复性良好。对67份临床样品进行检测,病毒分离培养法检测出23份阳性样品,LNA-TaqMan探针荧光定量PCR方法检测出26份阳性样品,常规TaqMan探针法检测出21份阳性样品,与病毒分离法比较,LNA-TaqMan探针法的符合率为96%。本研究建立的基于LNA-TaqMan探针检测猪伪狂犬病病毒野毒株的荧光定量PCR方法,为猪伪狂犬病的诊断和流行病学调查提供了可靠的技术支持。

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