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重组鸭α-干扰素的表达与鉴定

作  者:
郭艳丽;朱善元;徐佳忆;吴植;王永娟
单  位:
南京师范大学生命科学学院
关键词:
鸭;α-干扰素;原核表达;抗体;纯化;抗病毒
摘  要:
根据大肠杆菌密码子的偏好性,试验对GenBank中已经发表的鸭α-干扰素基因序列进行密码子优化,人工合成后构建原核表达质粒pET30a-DuIFNα-ELP;将重组表达质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达制备DuIFNα-ELP;通过SDS-PAGE切胶方法得到纯化的DuIFNα-ELP;纯化产物免疫小鼠后收获血清,用Western blotting验证免疫血清的特异性,并用ELISA法检测其特异性抗体滴度.根据类弹性蛋白多肽(ELP)温度敏感的可逆相变特性,通过重复可逆相变循环(ITC),在高盐离子浓度和临界温度下纯化重组蛋白,并采用微量细胞病变抑制法在MDCK/VSV系统中检测重组蛋白的抗病毒活性.结果表明:合成的重组鸭α-干扰素基因能成功表达,重组蛋白DuIFNα-ELP约80 ku,免疫小鼠可产生特异性抗体,抗体效价为1∶1000000.抗病毒试验检测重组DuIFNα-ELP的抗病毒活性为1.0*106U/mL,比活性为1.25*106U/mg.这一结果为研制广谱、安全、高效的基因工程鸭α-干扰素提供参考,也为检测体内外DuIFNα的表达奠定了基础.
作  者:
GUO Yanli;ZHU Shanyuan;XU Jiayi;

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