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Position: Home > Articles > Prokaryotic expression of major antigenic epitope of Japanese encephalitis virus Heilongjiang Animal Science and Veterinary Medicine 2014 (1) 20-22+26

流行性乙型脑炎病毒E蛋白主要抗原表位的原核表达

作  者：
李云云;郭万柱
单  位：
赤峰农牧学校畜牧兽医系;四川农业大学动物生物技术中心
关键词：
乙型脑炎病毒;E蛋白主要抗原域;原核表达
摘  要：
为了克隆乙型脑炎病毒E蛋白主要抗原片段基因的原核表达系统,试验采用RT-PCR方法扩增乙型脑炎病毒E蛋白上2个重要抗原域73~88 aa和292~402 aa,并将其定向连接至原核表达载体pET-32a(+),构建重组质粒pET-EAB,再将重组质粒转入大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞,用IPTG进行诱导表达,应用SDS-PAGE和Western-blot技术对表达产物进行检测与鉴定。结果表明:经SDS-PAGE分析,表达出的目的蛋白主要以包涵体形式存在;再使用Western-blot技术对纯化复性后的包涵体进行检测,证实其具有免疫活性。
译  名：
Prokaryotic expression of major antigenic epitope of Japanese encephalitis virus
作  者：
LI Yun-yun;GUO Wan-zhu;Department of Animal Husbandry and Veterinary Medicine,Chifeng Agricultural and Pastoral School;Center of Animal Biotechnology,Sichuan Agricultural University;
关键词：
Japanese encephalitis virus;;major antigenic domain of E protein;;prokaryotic expression
摘  要：
To clone a prokaryotic expression system of major antigenic segment of Japanese encephalitis virus( JEV) E protein gene. A fragment about the E protein on the two major antigenic domain of 73 ~ 88 aa and 292 ~ 402 aa was amplified by RT-PCR,and then the fragment was cloned into the prokaryotic expression vector pET-32a( +) to construct prokaryotic expression plasmid pET-EAB. After confirmed positive by enzyme digestion,the recombinant plasmid was transformed into E. coli Rosetta( DE3),and then was induced using IPTG for the expression of EAB protein. The expression products were detected and identified using SDS-PAGE and Western-blot. The results showed that the expressed target protein existed mainly in the form of inclusion body using SDS-PAGE analysis; and then the Western-blot analysis was used to determine the inclusion body after purified and refolded. It is confirmed that the EAB protein has immune activity.

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