罗涛;李宇;汪芳;翁泽斌;熊玲;宋海昭;王銮凤;沈新春

南京中医药大学中医学院;南京财经大学食品科学与工程学院江苏省现代粮食流通与安全协同创新中心江苏高校粮油质量安全控制及深加工重点实验室

麦胚肽;细胞氧化损伤;成骨-破骨细胞共育体系;细胞稳态

目的：为促进麦胚的高值化利用，建立H₂O₂诱导的成骨细胞（osteoblast,OB）-破骨细胞（osteoclast,OC）共育体系氧化应激模型，探究麦胚源活性肽ADWGGPLPH对OB和OC活性的影响。方法：利用流式细胞术、噻唑蓝（3-（4,5-dimethylthiazol-2-yl）-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide,MTT）增殖实验、异硫氰酸荧光素（fluorescein?isothiocyanate,FITC）/碘化丙啶（propidium iodide,PI）双染等方法，明确麦胚源活性肽对氧化应激环境中OB增殖和凋亡的作用。利用碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）活力检测、酶联免疫吸附测定以及抗酒石酸酸性磷酸酶（tartrate resistant acid phosphatase,TRAP）染色等方法研究麦胚源活性肽对氧化应激共育体系中OB和OC分化活性的影响。结果：麦胚源活性肽能够有效抑制氧化应激共育体系中OB内活性氧的增加，并通过抑制丙二醛生成，增强谷胱甘肽过氧化物酶、超氧化物歧化酶活力，提高OB免受自由基攻击以及清除自由基的能力。麦胚源活性肽可显著抑制氧化应激共育体系中OB凋亡（FITC/PI双染结果显示OB凋亡率由12.4%下调至5.3%,OB细胞活力由60.4%提高至92.8%（P＜0.01）），改善了OB增殖水平。此外，麦胚源活性肽对OB早期分化活性指标ALP活力、蛋白I型胶原以及晚期分化活性指标骨钙素水平的下降具有良好改善作用，OB矿化率从21.3%提高至84.3%（P＜0.01），从而使OB发挥良好的分化活性和矿化功能。TRAP染色结果显示麦胚源活性肽也能有效抑制氧化应激造成的OC过度分化（OC相对阳性面积从376.4%减小至128.1%（P＜0.01））。结论：麦胚源活性肽对H₂O₂诱导的OB-OC共育体系中细胞氧化损伤具有保护作用，从而维持良好的细胞稳态，本实验可为麦胚蛋白的开发利用提供一定的理论参考。