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当前位置: 首页 > 文章 > 猪戊型肝炎病毒结构蛋白片段的表达及其在ELISA中的初步应用 畜牧兽医学报 2006,37 (11) 1198-1201
Position: Home > Articles > Expression of Swine Hepatitis E Virus ORF2 and Development of ELISA Based on the Expressed Protein Chinese Journal of Animal and Veterinary Sciences 2006,37 (11) 1198-1201

猪戊型肝炎病毒结构蛋白片段的表达及其在ELISA中的初步应用

作  者：
赵宇军;许冬梅;朱远茂;薛飞;相文华
单  位：
山西农业大学动物科技学院;山西农业大学生命科学院;中国农业科学院哈尔滨兽医研究所
关键词：
猪戊型肝炎;结构蛋白基因;原核表达;ELISA
摘  要：
为建立一种快速的猪戊型肝炎病毒抗体检测方法,根据已克隆的戊型肝炎病毒株DQ1结构蛋白基因(ORF2)的抗原性及水溶性分析,在其序列上设计一对引物,上游引物和下游引物分别带有BamHⅠ、HindⅢ酶切位点,用PCR方法扩增,获得369 bp大小的相应片段,位于ORF2 128-497 bp处。将扩增片段克隆到pET-32a构建了原核表达载体pET32a-DQ01,经测序证明该片段正确插入。将pET32a-DQ01转化BL21并诱导表达,SDS-PAGE结果显示表达蛋白大小为33 ku,Western-blot结果表明表达的蛋白质具有生物活性,将表达蛋白作为诊断抗原,对反应条件进行优化,初步建立了ELISA诊断方法。
译  名：
Expression of Swine Hepatitis E Virus ORF2 and Development of ELISA Based on the Expressed Protein
作  者：
ZHAO Yu-jun~1,XU Dong-mei~2,ZHU Yuan-mao~3,XUE Fei~3,XIANG Wen-hua~(3*)(1.College of Animal Science,Shanxi Agricultural University,Taigu 030801,China;2.College of Life Science,Shanxi Agricultural University,Taigu 030801,China;3.Harbin Veterinary Research Institute,Chinese Academy of Agricultural Sciences,Harbin 050001,China)
关键词：
swine HEV;ORF2;prokaryotic expression;ELISA
摘  要：
To develope a method to detect the antibody of swine hepatitis E virus in pigs,a pair of primers were designed according to the ORF2 of swine hepatitis E virus DQ1 strain,and the ORF2 about 369 bp was amplified by PCR.Then the fragment was inserted into pET-32a to establish a expression vector which was named pET32a-DQ1.The sequence analysis showed that the sequence was correct.Then the pET32a-DQ1 was transformed into E.coli BL21,the segment was expressed.The result of SDS-PAGE showed that the expressed protein was about 33ku.Western-blot results indicated that the protein could reacted with swine HEV antiserum.With the protein,a ELISA method for detection of HEV was developed and the primary test revealed the feasibility for clinical use.

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