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Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine
2020
(11)
金黄色葡萄球菌杀白细胞素基因敲除菌株的构建及生长特性分析
作 者：
刘文宇;祝瑶;王长珍;杨亲;栾天;王凌利;刘思国;周学章;张万江
单 位：
中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病创新团队;宁夏大学生命科学学院
关键词：
杀白细胞素;同源重组;遗传稳定性
摘 要：
为构建金黄色葡萄球菌杀白细胞素(PVL)基因敲除的菌株,本研究以pBT2温敏型质粒为载体,构建金黄色葡萄球菌PVL基因敲除质粒pBT2-ΔPVL,并经酶切鉴定.将其转化至金黄色葡萄球菌RN4220中经其修饰后电转化至金黄色葡萄球菌ATCC 49775中,在30℃和42℃多次交替传代并经红霉素抗性筛选,构建PVL基因敲除菌株,经PCR和测序鉴定后命名为ΔPVL.以pLI50穿梭质粒为载体,构建金黄色葡萄球菌PVL基因回补质粒pLI50-PVL,按照同样方法将其转化至敲除菌株ΔPVL中,构建PVL基因回补菌株CΔPVL.将ΔPVL在TSB培养基中连续传代培养后,经PCR检测敲除菌株体外的遗传稳定性;分别绘制敲除菌株ΔPVL和回补菌株CΔPVL的生长曲线,检测其体外生长特性.结果显示,正确构建了两种质粒pBT2-ΔPVL、pLI50-PVL和两种菌株ΔPVL、CΔPVL.敲除菌株ΔPVL连续传代未发生回复突变,具有良好的遗传稳定性.生长特性结果显示敲除菌株生长速率显著低于野生菌株,表明PVL基因在金黄色葡萄球菌的生长调节中发挥着一定的作用.本研究为进一步研究金黄色葡萄球菌PVL的功能及致病机制奠定了基础.
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