王睿男;蒋菲;刘亚涛;宋晓晖;刘永生;王文;储岳峰;曹小安;王传彬;孙雨

中国动物疫病预防控制中心;中国农业科学院兰州兽医研究所;新疆维吾尔自治区动物疾病预防控制中心

重组牛IFN-γ蛋白;杆状病毒;真核表达;蛋白纯化;

为合成与天然构象相似的干扰素γ蛋白,通过优化干扰素序列的密码子序列,利用杆状病毒表达系统合成真核重组牛IFN-γ蛋白。实验化学合成牛IFN-γ基因,并将该基因克隆至真核表达载体pFastBacHTA中,将构建成功的重组载体与DH10Bac感受态大肠杆菌进行转座形成穿梭载体,穿梭载体质粒瞬时转染至SF9昆虫细胞中,获得重组杆状病毒,最后利用SF9昆虫细胞悬浮培养大量表达目的蛋白。蛋白纯化后经Western Blotting和BOVIGAM牛分枝杆菌IFN-γELISA检测试剂盒检测分析,具有较好的免疫原性和反应原性。研究结果为牛IFN-γ的单克隆抗体制备以及牛结核病临床诊断奠定了基础。