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当前位置: 首页 > 文章 > 传染性法氏囊病病毒VP2单克隆抗体夹心ELISA检测试剂盒的研制 中国兽医学报 2014,34 (4) 530-535
Position: Home > Articles > Development of a sandwich ELISA based on the monoclonal antibodies against VP2 of infectious bursal disease virus Chinese Journal of Veterinary Science 2014,34 (4) 530-535

传染性法氏囊病病毒VP2单克隆抗体夹心ELISA检测试剂盒的研制

作  者：
刘静静;王永山;欧阳伟;夏兴霞;潘群兴;王晓丽;毕振威;诸玉梅;朱瑞良
单  位：
山东农业大学动物科技学院;江苏省农业科学院兽医研究所/农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心
关键词：
传染性法氏囊病病毒(IBDV);VP2;单克隆抗体(mAb);夹心ELISA
摘  要：
为研制传染性法氏囊病病毒(IBDV)快速检测试剂盒,用重组IBDV-VP2蛋白免疫BALB/c小鼠,制备免疫脾细胞,与SP2/0骨髓瘤细胞触合,获得3株稳定分泌抗VP2蛋白单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞株,分别命名为1D11、2G8和2E5,抗体亚类分别为IgG1κ、IgG2bκ和IgG1κ。间接免疫荧光试验(IFA)证明,3株单抗均与VP2发生特异性反应。相加ELISA证明3株mAb识别VP2不同的抗原表位。在病毒中和试验中,1D11和2G8腹水对IBDV的中和效价分别为104和103,而2E5无中和活性。用亲和层析方法纯化1D11和2E5,分别作为包被抗体和标记抗体,建立了IBDV夹心ELISA检测方法,优化了试验条件,测定了其主要性能指标,对IBDV的最低检出量为102 TCID50/mL。用夹心ELISA、AGP和RT-PCR 3种方法同步检测8种试验样品,夹心ELISA与RT-PCR的检测结果一致,显著高于AGP方法。组装成的试剂盒,置于37℃保存7d、4℃保存6个月和-20℃保存24个月,其检测结果没有显著差异(P>0.05)。
译  名：
Development of a sandwich ELISA based on the monoclonal antibodies against VP2 of infectious bursal disease virus
作  者：
LIU Jing-jing;WANG Yong-shan;OUYANG Wei;XIA Xing-xia;PAN Qun-xing;WANG Xiao-li;BI Zhen-wei;ZHU Yu-mei;ZHU Rui-liang;College of Animal Science and Technology,Shandong Agricultural University;Institute of Veterinary Medicine,Jiangsu Academy of Agricultural Sciences/Key Laboratory of Veterinary Biological Engineering and Technology,Ministry of Agriculture/National Center for Engineering Research of Veterinary Bio-products;
关键词：
infectious bursal disease virus(IBDV);;VP2 ;;monoclonal antibody(mAb);;sandwich ELISA
摘  要：
Three hybridomas secreting monoclonal antibodies(mAb)against VP2 of infectious bursal disease virus(IBDV)were established by fusing SP2/0with spleen cells from BALB/c mice immunized with virus-like-particle recombinant VP2 protein,designated as 1D11,2G8and 2E5.The subtypes of immunoglobulin were IgG2bκ,IgG2bκand IgG1κ,respectively.Indirect immunofluorescence assay(IFA)proved that the three mAb could react to VP2 specifically.Additivity ELISA revealed that three mAbs recognized spatially independent epitopes of VP2 .Neutralization test indicated that the neutralization titer of 1D11and 2G8was 104 and 103 respectively,while 2E5did not have neutralizing activity.A sandwich ELISA was established using 1D11as capture antibody and 2E5as enzyme-labeled antibody,and the detectable minimum of IBDV was 102 TCID50/mL.The detection kit of sandwich ELISA was developed and proved to be applicable to the clinical detection of IBDV.

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