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Position: Home > Articles > 胞内劳森菌鞭毛素蛋白FliC与猪肠上皮细胞互作蛋白的研究 Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine 2021 (12) 1324-1329

胞内劳森菌鞭毛素蛋白FliC与猪肠上皮细胞互作蛋白的研究

作  者：
于振兴;张兰桥;杨莹莹;张锦华;何后军;戴益民
单  位：
江西农业大学动物科学技术学院;江西农业大学生物科学与工程学院
关键词：
增生性肠炎;胞内劳森菌;鞭毛素蛋白FliC;免疫共沉淀;病原菌-宿主相互作用;
摘  要：
为鉴定胞内劳森菌鞭毛蛋白FliC与猪肠上皮细胞中的互作蛋白,本研究利用PCR方法从回肠炎疫苗提取的DNA中扩增胞内劳森菌鞭毛素基因LI0710,并将其克隆至原核表达载体pET32a（+）中构建重组质粒pET32aLI0710,经双酶切及测序鉴定正确后转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞,经IPTG诱导并经SDS-PAGE检测。结果显示,获得可溶且与硫氧还蛋白-6×His-S标签（Trx-His-S）融合表达的重组FliC蛋白（Trx-His-S-FliC）。采用镍柱亲和层析法纯化Trx-His-S和Trx-His-S-FliC,并分别与猪肠上皮细胞（IPEC-J2）裂解液孵育后,利用anti-His抗体进行免疫共沉淀试验（Co-IP）,并对沉淀物利用液质联用串联质谱（LC/MS/MS）技术分析与FliC互作的宿主蛋白,利用Proteome Discoverer 1.4软件在UniProtKB/Swiss-Prot数据库中对互作的宿主蛋白进行肽指纹图谱分析。Co-IP结果显示,检测到了多个与Trx-His-S-FliC互作的宿主蛋白,且通过LC/MS/MS技术共鉴定到50个与FliC互作的蛋白。这些互作蛋白包括蛋白酶、多个核糖体蛋白和线粒体蛋白,广泛参与了细胞质糖酵解、氨基酸代谢、ATP跨膜转运等功能。为了证明质谱数据的可靠性,选择与FliC互作最强的胰蛋白酶经western blot验证,结果显示,胰蛋白酶与FliC蛋白确实存在互作,表明质谱数据可靠。本研究首次鉴定到多个与胞内劳森菌鞭毛蛋白FliC互作的宿主蛋白,为研究FliC蛋白的功能奠定了基础。

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