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当前位置: 首页 > 文章 > 皱纹盘鲍HdhTPX2基因在毕赤酵母中的表达及抗氧化活性研究 大连海洋大学学报 2019,34 (4) 463-469
Position: Home > Articles > Expression and antioxidant activity of HdhTPX2 gene from disk abalone Haliotis discus hannai Ino in yeast Pichia pastoris Journal of Dalian Ocean University 2019,34 (4) 463-469

皱纹盘鲍HdhTPX2基因在毕赤酵母中的表达及抗氧化活性研究

作  者：
乔琨;乔琨;方春华;方春华;陈贝;陈贝;彭会;彭会;潘南;潘南;蔡水淋;蔡水淋;许旻;许旻;陈丽娇;陈丽娇;郝华;郝华;刘智禹;刘智禹
单  位：
福建省水产研究所福建省海洋生物增养殖与高值化利用重点实验室;福建农林大学食品科学学院;厦门大学海洋与地球学院
关键词：
皱纹盘鲍;硫氧还蛋白过氧化物酶;毕赤酵母;抗氧化
摘  要：
为研究皱纹盘鲍Haliotis discus hannai Ino硫氧还蛋白过氧化物酶(TPX2)蛋白的抗氧化活性,将HdhTPX2基因克隆至pPIC9K载体,通过电击转化至毕赤酵母GS115菌株中,获得重组表达质粒pPIC9K-HdhTPX2,经甲醇诱导及亲和层析纯化得到重组HdhTPX2蛋白,并进行质谱鉴定及体外抗氧化功能检测。结果表明:本研究中成功构建了重组毕赤酵母菌株GS115/pPIC9K-HdhTPX2,经表达条件的优化,在pH为7的培养基中用0.5%甲醇诱导表达72 h,分泌表达上清液中得到相对分子质量约为25 000的稳定表达产物,纯化后的蛋白经质谱鉴定为目的蛋白;体外活性测定发现,该蛋白清除羟自由基(·OH)能力强于维生素C,并对H_2O_2引起的细胞损伤具有一定的保护作用。研究表明,皱纹盘鲍硫氧还蛋白过氧化物酶HdhTPX2在毕赤酵母表达系统中得到高效表达,重组表达产物具有抗氧化活性功能。
译  名：
Expression and antioxidant activity of HdhTPX2 gene from disk abalone Haliotis discus hannai Ino in yeast Pichia pastoris
作  者：
QIAO Kun;FANG Chun-hua;CHEN Bei;PENG Hui;PAN Nan;CAI Shui-lin;XU Min;CHEN Li-jiao;HAO Hua;LIU Zhi-yu;Key Laboratory of Cultivation and High-value Utilization of Marine Organisms in Fujian Province, Fisheries Research Institute of Fujian;School of Food Science,Fujian Agriculture and Forestry University;College of Ocean and Earth Sciences, Xiamen University;
关键词：
Haliotis discus hannai Ino;;thioredoxin peroxidase;;Pichia pastoris;;antioxidant
摘  要：
HdhTPX2 gene was cloned into pPIC9 K vector and transformed into yeast Pichia pastoris GS115 strain by electroporation to obtain recombinant expression plasmid pPIC9 K-HdhTPX2 in order to study the antioxidant activity of HdhTPX2 from disk abalone Haliotis discus hannai Ino. The recombinant product was induced by methanol, purified using immobilized metal affinity chromatography and confirmed using MS-fingerprinting to gain more information on its antioxidant function. The recombinant plasmid GS115/pPIC9 K-HdhTPX2 was shown to be constructed successfully, and the optimal expression was found under conditions of incubation with 0.5% methanol for 24 h at 28 ℃ and pH 6.0, with a stable expressed product with molecular weight of about 25 000, consistent with the calculated molecular weight of HdhTPX2. The mass spectrum analysis revealed that the recobinant HdhTPX2 as purified recombinant protein showed stronger ability to scavenge hydroxyl radicals than VC and protect cells against the toxicity caused by H_2O_2 in vitro antioxidant activity. The findings indicate that yeast P.pastoris is an effective expression system for producing large quantities of biological active HdhTPX2.

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