吴浩东;孙浩;陈乐;黄灿;程尚;曹礼静;王庆华

重庆市畜牧技术推广总站;西南大学动物医学院;重庆市荣昌区职业教育中心

纳米硫化亚铁;蜜蜂微孢子虫;分离鉴定;抗真菌活性;铁死亡

在分离鉴定出东方蜜蜂微孢子虫(N.ceranae)的基础上，对蛋清源纳米硫化亚铁(nano-FeS)的合成方法进行优化并探究其对N.ceranae的体内外抑菌作用。从感染蜂群中分离致病菌，经形态学和分子生物学鉴定为N.ceranae。通过体外试验证明了nano-FeS对N.ceranae的抑菌作用及机制。通过体内试验证实了nano-FeS对N.ceranae病的治疗作用。结果显示，采用热溶剂法合成了nano-FeS,并通过正交试验筛选出最佳合成方法。流式细胞术和荧光染色试验证实，nano-FeS促进N.ceranae的凋亡坏死。nano-FeS处理后发现，N.ceranae细胞内发生铁富集，破坏谷胱甘肽和谷胱甘肽过氧化物酶抗氧化系统，并导致活性氧(ROS)积累，最终导致细胞膜脂质过氧化。体内试验表明，用nano-FeS饲喂蜜蜂后，感染N.ceranae的蜜蜂病死率降低，中肠内的孢子数量减少。利用转录组和荧光定量PCR揭示了nano-FeS对感染N.ceranae蜜蜂中肠基因表达的影响。结果表明，合成并优化了抗N.ceranae的nano-FeS的合成方法，平均粒径为75 nm。本研究不仅提供了一种治疗蜜蜂微孢子虫感染的潜在药物，而且发现nano-FeS的抗真菌机制与铁死亡有关，nano-FeS对N.ceranae的抑菌作用与nano-FeS质量浓度呈正相关关系。