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Jiangsu Agricultural Sciences
2020,48
(20)
62-67
云红梨1号HY5基因原核表达载体的构建、表达和纯化
作 者：
苏俊;陈璐;马伟荣;杨谨;黄兴龙;陈霞;舒群
单 位：
云南省红河州经济作物技术推广站;云南农业科学研究院园艺作物研究所;云南农业大学园林园艺学院;石林县经济作物站;云南省农业科学院经济作物研究所
关键词：
HY5基因;云红梨1号;原核表达载体;诱导表达;纯化
摘 要：
HY5为调控光形态建成的转录因子,调控花青素的生物合成与累积.通过构建云红梨1号HY5基因的原核表达载体,旨在为研究HY5蛋白的生物功能奠定基础.将云红梨1号的HY5基因构建到原核表达载体pGEX-4T-1上,并对其进行诱导表达,通过谷胱甘肽-S-转移酶(GST)亲和层析色谱柱纯化融合蛋白.结果表明,重组质粒pGEX-4T-1-PyHY5的酶切检测及测序结果均正确,表明重组质粒载体构建成功.十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结果显示,用100 mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)在37℃、220 r/min条件下诱导3 h后收集诱导菌株,在BL21菌株中均有明显的目的条带,诱导表达后的融合蛋白大小约为43.90 ku;PyHY5蛋白能够与pGEX-4T-1载体上的GST标签蛋白进行融合表达.通过研究成功构建了pGEX-4T-1-PyHY5原核表达载体,诱导表达并纯化出PyHY5融合蛋白为进一步研究其生物学功能奠定了基础.
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