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Chinese Journal of Veterinary Science
2015,35
(4)
601-607
含鸡源启动子的真核表达载体的构建及IBV S1蛋白抗原表位的表达
作 者：
牛婷;余松城;邹年莉;吴瑞婷;杨晓林;夏静;黄勇
单 位：
四川农业大学动物医学院
关键词：
鸡源型启动子;真核表达载体;β-actin;S1蛋白;抗原表位
摘 要：
利用PCR方法扩增出鸡β-肌动蛋白(β-actin)启动子基因序列,克隆至pcDNA3.1和pCIneo载体中以替代CMV启动子,获得含鸡源启动子的真核表达载体pcDNA-act和pCIneo-act。将IBV ZY3S1蛋白抗原表位基因亚克隆到启动子替换前后的质粒中,然后将重组质粒转染至鸡胚成纤维细胞(CEF)中,采用间接免疫荧光试验检测转染细胞对S1蛋白抗原表位的表达。将重组质粒以150μg/只的剂量肌注免疫SPF雏鸡,同时设立IBV灭活疫苗组及PBS空白对照组,经间接ELISA检测免疫前后血清中IBV特异性抗体,最后使用ZY3强毒株给各组实验动物攻毒,观察鸡群的发病死亡情况,计算攻毒保护率。结果显示,替换启动子后的表达载体在CEF中对S1蛋白抗原表位的表达量以及实验动物的抗IBV抗体水平均高于未更换启动子的相应载体,攻毒后鸡群的发病率和死亡率均比替换前降低,说明外源基因的表达和启动子的来源有密切的关系。
译 名：
Construction of eukaryotic expression vector with a chicken-origin promoter and the expressing of S1 protein epitopes in IBV
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