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美洲商陆遗传转化体系的构建

作  者:
杨杰;杨子仪;徐亚莉;张源;郑铁松;陆长梅
单  位:
南京师范大学金陵女子学院;南京师范大学生命科学学院
关键词:
美洲商陆;遗传转化体系;外植体;不定芽;抗生素;筛选
摘  要:
在已构建高频再生体系的基础上,研究构建美洲商陆遗传转化体系的条件。结果表明:250 mg/L头孢霉素既能有效抑制根癌农杆菌的增殖,且对不定芽分化影响相对较小;美洲商陆对潮霉素高度敏感。美洲商陆的遗传转化过程为:无菌苗上部经增粗培养后,取茎节在不定芽分化培养基(ABDM)中预培养5 d,在D600 nm为0.6的菌液中侵染3~5 min,再转接到ABDM中黑暗、26℃共培养3 d;然后外植体经冲洗后转接至含250 mg/L头孢霉素的ABDM中进行脱菌、分化以及不定芽伸长培养;待不定芽长至2 cm以上时,截取并转接到含3 mg/L潮霉素的生根培养基中进行抗性芽筛选,筛选出的抗潮霉素植株再经GFP显色、PCR、分子杂交等方法进一步阳性确认。

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