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鸭肥胖基因的分子克隆、序列分析及原核表达

作  者:
戴汉川;龙良启
单  位:
华中农业大学水产学院淡水增养殖生物学重点实验室
关键词:
鸭;ob基因;基因表达;leptin
摘  要:
根据人、小鼠、猪等动物的肥胖基因编码区序列的保守性设计1对引物,利用RTPCR技术扩增出鸭肥胖基因的cDNA编码序列,将PCR产物插入pGEMT载体,经PCR和双酶切鉴定正确后进行序列测定,分析表明该cDNA序列由438个核苷酸组成,编码146个氨基酸组成的多肽,鸭与人、猪、小鼠、大鼠的核苷酸相似性分别为83%、84%、98%、94%;氨基酸的相似性分别为86%、83%、99%、96%。为了研究鸭肥胖基因体外表达的特点,构建了原核表达载体pET28aYa,在大肠杆菌中进行了诱导表达。结果表明,鸭肥胖基因在大肠杆菌中进行了高效特异性融合表达,融合蛋白分子量约为20ku,其中16ku为鸭肥胖基因表达的蛋白质,经薄层扫描分析,目的蛋白约占菌体总蛋白的30%。鸭肥胖基因的克隆和表达研究,为进一步研究鸭leptin的功能与应用奠定了基础。
译  名:
Molecular Cloning of the Obese Gene from Duck and Its Expression in E.coli

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