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Position: Home > Articles > Construction and Identification of MSTN Knockout AAV-SaCas9 Journal of Henan Agricultural Sciences 2018 (1) 118-121

AAV-SaCas9敲除MSTN基因病毒的构建及鉴定

作  者:
汪新建;樊爽爽;翁少亭;杨国宇;褚贝贝;王江
单  位:
河南农业大学/农业部动物生化与营养重点开放实验室
关键词:
肌肉生长抑制素基因;CRISPR-Cas9;腺相关病毒载体;293T细胞
摘  要:
为了研究肌肉生长抑制素(MSTN)的相关功能,应用分子生物学方法构建敲除MSTN的AAVSaCas9载体,通过转染293T细胞提取基因组后进行T7酶切鉴定、TA克隆及测序确定该基因的敲除效果;将鉴定正确的AAV-SaCas9重组质粒与pHelper质粒共转染AAV-293细胞3 d后,分离纯化病毒并用实时荧光定量PCR法检测病毒滴度。结果显示,成功构建了敲除MSTN基因的AAV-SaCas9重组载体,T7酶切和测序鉴定出sgRNA2位点可以对MSTN进行编辑,并成功将其包装成病毒,经荧光定量PCR鉴定病毒滴度为2.73×10~(12)vg/mL。
译  名:
Construction and Identification of MSTN Knockout AAV-SaCas9

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