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Position: Home > Articles > 干扰KISS1基因对猪卵巢颗粒细胞功能的影响 Scientia Agricultura Sinica 2020 (23)

干扰KISS1基因对猪卵巢颗粒细胞功能的影响

作  者：
陆思羽;何颖婷;周小枫;辛晓萍;张爱玲;袁晓龙;张哲;李加琪
单  位：
广东省农业动物基因组学与分子育种重点实验室/国家生猪种业工程技术研究中心/华南农业大学动物科学学院;广东高校应用生态工程技术开发中心/广东第二师范学院生物与食品工程学院
关键词：
母猪;颗粒细胞;KISS1;PI3K;E2
摘  要：
[背景]卵泡是卵巢的基本结构和功能单位,其主要功能是排卵和分泌激素.颗粒细胞能促进卵泡发育,其过度凋亡能抑制卵泡发育,诱导卵泡闭锁,进而降低雌性动物发情频率,影响雌性动物繁殖力.现已有研究发现,KISS1在卵巢组织中发挥着重要作用.[目的]研究通过干扰KISS1,以阐释KISS1对猪卵巢颗粒细胞凋亡、周期及分泌雌激素能力的影响,为完善KISS1在猪颗粒细胞中的分子调控机制提供一定的依据.[方法]设计KISS1的干扰片段KISS1-siRNA,转染体外培养的母猪卵巢颗粒细胞,通过实时定量PCR(quantitative real time PCR, qRT-PCR)检测干扰KISS1对母猪卵巢颗粒细胞中磷脂酰肌醇3-激酶(phosphoinositide3-kinase, PI3K)信号通路部分基因转录水平的影响;采用流式检测法、Annexin V-FITC及ELISA技术,分别探究干扰KISS1对颗粒细胞周期、凋亡及雌二醇(estradiol, E2)分泌量的影响,最后使用qRT-PCR技术检测KISS1对雌激素受体及雌激素信号通路关键基因转录水平的影响.[结果]在猪颗粒细胞内,干扰KISS1后,PI3K通路激活相关基因PIK3CG、PI3CI、PDK1及AKT1转录水平下降,其中关键基因AKT1的转录水平显著降低(P<0.05),PI3K通路激活抑制相关基因FOXO3、TSC2及BAD转录水平也有所降低;干扰KISS1后,颗粒细胞周期在细胞分裂间期(G0/G1)阻断,细胞的凋亡率显著上升,细胞中E2的浓度显著降低(P<0.01),雌激素受体ESR1和ESR2及雌激素通路的基因Star、CYP17、3B-HSD、17B-HSD和CYP19A转录水平也相应显著下降(P<0.05).[结论]KISS1能够参与猪颗粒细胞PI3K和雌激素通路,干扰KISS1能够使卵巢颗粒细胞阻滞在细胞分裂间期,促进颗粒细胞凋亡,降低颗粒细胞分泌雌激素的能力,表明KISS1对于卵巢颗粒细胞的分裂与生长、雌激素分泌具有重要作用.

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