林盛国;侯林;陈志娟;徐明玉;王璐

辽宁师范大学

国孤雌生殖卤虫;mRNA差异显示;SYBRGreenⅠ;硝酸银;溴化乙锭

利用mRNA差异显示技术研究中国孤雌生殖卤虫胚胎发育的相关基因,并对中国孤雌生殖卤虫差异显示中SYBR GreenⅠ、硝酸银和溴化乙锭三种染色方法进行了比较。以三种单碱基锚定引物对发育0 h,4 h,8 h,12 h,16 h和10天的中国孤雌生殖卤虫的 RNA进行逆转录和26种随机引物进行PCR反应,经非变性的6%聚丙稀酰胺凝胶电泳后,分别用 SYBRGreenⅠ、硝酸银和溴化乙锭染色,最后进行差异条带的回收和再扩增。结果表明:(1)6 种样本的DD PCR产物显示长200 3.0k不等的扩增片段,条带清晰,并呈现出有无和强弱的变化(2)SYBR GreenⅠ和硝酸银染色的灵敏度比溴化乙锭染色的灵敏度高(3)经 SYBR GreenⅠ和溴化乙锭染色的凝胶的回收和再扩增效率比硝酸银染色的高(4)水煮法和 NAP 25 过柱法对凝胶片段的回收效果几乎相当。利用mRNA差异显示技术研究中国孤雌生殖卤虫胚胎发育相关基因时,得到了较好的扩增片段;三种染色方法中 SYBR GreenⅠ染色灵敏度较高,并且SYBR GreenⅠ染色有利于凝胶片段的回收和再扩增。