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Position: Home > Articles > 牛let-7a与CC趋化因子受体7基因靶向关系的验证 Journal of Fujian Agriculture and Forestry University(Natural Science Edition) 2023 (6) 820-826

牛let-7a与CC趋化因子受体7基因靶向关系的验证

作  者：
徐萍;申祥;Fotina Hanna;王三虎;张晓建
单  位：
新乡学院生物工程学院/动物疫病分子诊断河南省工程实验室;河南科技学院动物科技学院;乌克兰苏梅国立农业大学兽医学院
关键词：
牛;CC趋化因子受体7;3′非编码区;let-7a
摘  要：
为了验证小分子RNA let-7a与其预测靶基因CC趋化因子受体7（CCR7）之间的关系，采用生物信息学软件预测CCR7的3′非编码区（3′UTR）是否存在与let-7a的靶向结合位点；利用PCR扩增出包含靶向结合位点区域的CCR7-3′UTR,并构建其荧光素酶表达载体；将验证后的阳性重组子瞬时共转染人胚胎肾细胞293（293T）,进行双荧光素酶报告基因检测；通过将合成的let-7a模拟物和let-7a抑制剂分别转染奶牛乳腺上皮细胞MAC-T,利用qRT-PCR和ELISA检测let-7a与CCR7基因mRNA和蛋白表达水平的变化，验证两者之间的靶向调控关系。菌液PCR和双酶切结果表明，成功构建了重组双荧光素酶报告质粒pMIR-REPORTTM-CCR7-3′UTR。双荧光素酶报告基因检测结果表明，let-7a与CCR7基因之间确实存在靶向调控关系。qRT-PCR和ELISA进一步证实了过表达let-7a能显著下调MAC-T细胞中CCR7基因mRNA和蛋白的表达量（P＜0.05）,两者存在负调控关系。本研究结果证实了let-7a与CCR7基因之间存在靶向调控关系，为进一步探究其分子机制提供参考。

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