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Position: Home > Articles > Expression of phospholipase A_2 gene from the venom of Apis mellifera in the baculovirus-insect cell system Acta Entomologica Sinica 2006,49 (3) 367-372

意大利蜜蜂蜂毒磷脂酶A_2基因在杆状病毒-昆虫细胞系统中的表达

作  者:
沈立荣;邢丽苹;张传溪;程家安
单  位:
浙江大学应用昆虫学研究所
关键词:
意大利蜜蜂;蜂毒;磷脂酶A2基因;杆状病毒-昆虫细胞系统;表达
摘  要:
利用BactoBac系统将意大利蜜蜂蜂毒磷脂酶A2(AmPLA2)基因cDNA克隆至转移载体pFastBacHTa中,得到pBacHT-AmPLA2,再将其转化入含穿梭载体Bacmid的受体大肠杆菌DH10Bac中,通过转座作用,得到含AmPLA2基因的重组病毒rBacmid-AmPLA2的DNA。提取其基因组DNA,用脂质体介导转染粉纹夜蛾细胞Tn-5B1-4,得到重组病毒rACV-Bac-AmPLA2。用此重组病毒感染Tn-5B1-4细胞,在细胞中表达AmPLA2。SDS-PAGE电泳结果显示,与6×HisTag融合表达的产物蛋白分子量约为18kD左右,表达量约占细胞总蛋白的5·35%。Westernblot印迹显示,融合表达产物能与意大利蜜蜂蜂毒AmPLA2抗血清发生免疫反应。生物活性测定显示,含表达产物的细胞蛋白粗提物对底物蛋黄的酶活力约为6·13μmol·min-1·mg-1。
译  名:
Expression of phospholipase A_2 gene from the venom of Apis mellifera in the baculovirus-insect cell system

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