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Journal of Nanjing Agricultural University
2023,46
(5)
922-932
黄色瘤胃球菌双功能酶xynD基因在毕赤酵母中的表达及其酶学特征
作 者：
王蕾;李文菁;杨东林;陈勇
单 位：
新疆农业大学动物科学学院
关键词：
黄色瘤胃球菌;双功能酶;毕赤酵母;异源表达;酶学性质
摘 要：
[目的]黄色瘤胃球菌xynD基因编码葡聚糖酶和木聚糖酶 2 个独立的催化结构域.本研究在毕赤酵母中导入xynD基因,表达蛋白并对其酶活性及酶学性质进行研究.[方法]根据毕赤酵母的密码子偏爱性对xynD基因优化(优化后的基因命名为xynDm),构建重组质粒 pPIC9K-xynDm,转化至毕赤酵母 GS115,通过筛选获得基因工程菌株 GS115-pPIC9K-xynDm,经诱导表达获得重组XynDm,再对其酶学性质进行初步研究.[结果]XynDm的木聚糖酶与葡聚糖酶在 36 和 72h酶活性和比活性均达到最大值,分别为 265.32、468.36 IU·mg-1和 2 260.87、3 208.31 IU·mg-1.XynDm的木聚糖酶活性在温度37~40℃、pH值为 4.5~6.5 时较稳定,最适酶活性温度和pH值分别为 37℃和 6.0,对 4-O-甲基-D-葡萄糖醛酸-D-木聚糖、高黏度阿拉伯木聚糖和桦木木聚糖有良好的水解作用;XynDm的葡聚糖酶活性在温度 40~55℃、pH值为 5.0~9.0 时较稳定,最适酶活性温度和pH值分别为 55℃和 6.0,对大麦β-葡聚糖有水解作用.XynDm双功能酶活性被Cu2+、Zn2+和Co2+激发,Ag+和SDS使其酶活性几乎丧失.[结论]XynDm木聚糖酶和葡聚糖酶的最适底物分别为 4-O-甲基-D-葡萄糖醛酸-D-木聚糖和大麦β-葡聚糖,最适温度分别为 37 和 55℃,最适pH值均为 6.0.
译 名：
Heterologous expression and characterization of a bifunctional enzyme xynD gene derived from Ruminococcus flavefaciens in Pichia pastoris
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