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检测猪分子伴侣Jiv基因的SYBR GreenI荧光定量RT-PCR方法的建立

作者：

谭学超;郭抗抗;宁蓬勃;刘伟;曹伟伟;徐磊;武宁;林青

关键词：

Jiv蛋白;猪瘟病毒;荧光定量RT-PCR;SYBR;Green;I

摘要：

Jiv蛋白是一种与猪瘟病毒(CSFV)复制密切相关的细胞分子伴侣,为检测CSFV感染细胞内分子伴侣Jiv基因表达变化,本研究以猪Jiv基因(DNAJCl4)为参考序列,建立了检测猪分子伴侣JiV基因的SYBRGreenI荧光定量RT.PCR方法.结果显示,所建方法的标准曲线相关系数为0.999,扩增效率为103.4%,在10'~10'拷贝数范围内具有较好的线性关系;对Jiv基N最低可检测到10拷贝,该方法的批内变异系数和批间变异系数均在O.5%以下,具有较高的敏感性和重复性.应用建立的方法对猪多种组织及猪源传代细胞中Jiv基N的表达进行检测,结果显示Jiv基因在所检测的组织和细胞中均有表达,表明所建方法可以用于Jiv基因的检测;同时对CSFV感染猪和阴性猪脾脏中的Jiv基因表达水平进行检测,统计发现CSFV感染猪脾脏中的Jiv基因表达水平显著上调,提示Jiv基因的表达在CSFV复制中发挥着一定的作用.本研究建立的检测猪Jiv基因的荧光定量RT.PCR方法为进一步明确Jiv蛋白在CSFV致病中的作用提供方法支持.

译名：

Establishment of a real-time RT-PCR based on SYBR Green I for detecting pig molecular chaperone Jiv gene

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