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马麝朊蛋白基因的克隆与原核表达

作  者:
王辉太;吴润;张小丽;姜中毅;陈豪泰
单  位:
甘肃农业大学动物医学院;兰州动物园;中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室
关键词:
马麝;朊蛋白基因;克隆;重组朊蛋白;原核表达
摘  要:
为了解马麝朊蛋白基因的结构特征和其细胞型朊蛋白的性质,应用分子克隆和DNA重组技术进行了马麝朊蛋白基因的克隆、序列分析及其原核表达。序列分析表明,马麝朊蛋白基因编码区是包含在单一外显子内的完整开放阅读框,全长为771 bp,与马鹿、白尾鹿以及乳牛和绵羊朊蛋白基因相比,核苷酸序列和推导氨基酸序列的同源性分别为97.3%~98.1%和97.7%~98.8%,说明朊蛋白基因在同科和不同科的反刍动物间是保守的;成功构建了马麝重组朊蛋白(85~233 aa)原核表达载体pGEX-MuPrP(85~233),并转化E.coliBL21(DE3),获得重组表达菌E.coliGST-MuPrP(85~233),该重组菌可产生预期大小约为42.4ku的融合蛋白GST-MuPrP(85~233),在优化表达条件下,可产生占细菌总蛋白量30%以上的融合蛋白,免疫印迹检测显示表达蛋白可与抗牛单克隆抗体4C11反应,表明该基因的各氨基酸突变并未影响其单抗4C11的识别表位。
译  名:
Cloning and prokaryotic expression of Moschus sifanicus prion protein gene

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