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非洲马瘟病毒VP7基因的克隆及其在昆虫细胞中的表达

作  者:
李富祥;杨仕标;艾军;周晓黎;赵文华;王金萍
单  位:
云南出入境检验检疫局;云南省畜牧兽医科学院
关键词:
非洲马瘟病毒;VP7基因;杆状病毒表达;昆虫细胞
摘  要:
为了获得具有天然活性的非洲马瘟病毒重组VP7蛋白,制备针对非洲马瘟VP7蛋白的单克隆抗体及建立快速抗体检测方法,本试验通过PCR扩增、胶回收纯化后经XbaⅠ和HindⅢ特异性酶切,将VP7基因克隆于昆虫杆状病毒表达载体pFastBacHTB,经PCR、酶切、测序鉴定后,成功构建了携带VP7基因的重组质粒pFastBacHTB-AHSV-VP7。该重组质粒转化含有杆状病毒穿梭载体的DH10Bac感受态细胞,经抗生素、PCR筛选,获得转座的杆粒Bacmid-AHSV-VP7,并在脂质体介导下转染Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒,再感染Sf9昆虫细胞,收获表达产物。表达产物经Western blotting分析表明,VP7重组蛋白得到表达,其分子质量大小约为45ku,且具有良好的生物活性。
译  名:
Cloning and Expression of VP7 Gene of African Horse Sickness Virus in Baculovirus Infected Insect Cells

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