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奶牛乳房炎源性肺炎克雷伯菌MrkD基因的原核表达及对乳腺上皮细胞黏附的研究

作  者:
崔琦;周雅坪;郭婷;武春霞;王宇琛;田广原;思汗;孙衍立;郝永清
单  位:
内蒙古巴彦淖尔市临河区农牧业局;呼伦贝尔市动物疫病预防控制中心;内蒙古农业大学兽医微生物学与免疫学实验室
关键词:
奶牛乳房炎;肺炎克雷伯菌;原核表达;MrkD基因;黏附
摘  要:
为探究奶牛乳房炎源性肺炎克雷伯菌(K.pn)黏附素MrkD蛋白对K.pn黏附奶牛乳腺上皮细胞的影响以及黏附素抗血清对阻断K.pn黏附奶牛乳腺上皮细胞的效果,本研究利用PCR扩增了K.pn MrkD基因,构建重组质粒pColdI-MrkD,将其转化至大肠杆菌后诱导表达,采用SDS-PAGE和western blot鉴定.结果显示,MrkD重组蛋白以可溶性形式表达,并具有较好的反应原性.将牛乳腺上皮细胞与1×108 cfu/mL K.pn稀释液共同孵育后,利用间接免疫荧光试验检测K.pn对奶牛乳腺上皮细胞的黏附,结果显示K.pn可以黏附奶牛乳腺上皮细胞.利用K.pn稀释液孵育经不同浓度MrkD重组蛋白作用的奶牛乳腺上皮细胞后,通过对黏附细菌数的统计和分析,结果表明MrkD重组蛋白可以显著抑制K.pn黏附奶牛乳腺上皮细胞.利用MrkD重组蛋白抗血清和K.pn抗血清分别与K.pn作用后计数黏附的奶牛乳腺上皮细胞,结果显示,MrkD重组蛋白抗血清与K.pn抗血清均能有效阻断K.pn的黏附,且重组蛋白抗血清效果较好.本研究获得了MrkD重组蛋白,首次检测了其在K.pn黏附奶牛乳腺上皮细胞中的影响以及该重组蛋白抗血清在阻断K.pn黏附细胞中的作用,为探究阻断细菌黏附以及奶牛乳房炎亚单位疫苗的研究奠定基础.
译  名:
Prokaryotic expression of MrkD gene of Klebsiella pneumoniae isolated from cow mastitis and its adhesion to mammary epithelial cells

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