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水貂阿留申病病毒VP2蛋白基因在昆虫杆状病毒表达系统中的表达

作  者:
王振军;吴威;闫喜军;呼延良浩;朱春生
单  位:
中国农业科学院特产研究所;中国农业科学院特产研究所经济动物疫病研究室吉林特研生物技术有限责任公司;白山市畜牧总站
关键词:
水貂;阿留申病病毒;VP2基因;结构蛋白;昆虫杆状病毒表达系统
摘  要:
为了得到结构和功能近似于天然的水貂阿留申病病毒G株(ADV-G)的衣壳蛋白VP2,将ADVG的VP2基因5′端添加His标签后克隆到杆状病毒转移载体(pFastBac1)后转化入大肠杆菌DH10Bac中重组,筛选重组成功的克隆进行菌液扩增,获得重组的杆粒(Bacmid),然后用重组杆粒转染昆虫细胞(sf9),获得重组的杆状病毒。用P3代病毒感染sf9细胞,接毒后第48小时进行免疫荧光试验,结果,检测到特异的绿色荧光,证实目的蛋白得到成功表达。Western-blot分析结果显示,表达的VP2蛋白能够与His标签单抗和ADV阳性血清产生特异性免疫印迹反应。经过对流免疫电泳(CIEP)验证,在敏感性、特异性、重复性、稳定性方面,表达的VP2蛋白与商业抗原有一致的表现。采用超速离心法对病毒液进行浓缩后,在电子显微镜下可见约为20nm的病毒样颗粒(VLPs)。以上试验结果表明,ADV VP2蛋白在昆虫杆状病毒中得到有效表达,并具有良好的反应原性。
译  名:
Expression of Aleutian mink disease parvovirus VP2 protein gene in a baculovirus vector system

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