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牛流行热病毒糖蛋白基因的原核表达与抗原性鉴定

作  者:
李志;郑福英;高闪电;王素艳;岳城;殷宏
单  位:
中国农业科学院兰州兽医研究所;新疆农业大学动物医学学院
关键词:
牛流行热病毒;原核表达;免疫原性分析
摘  要:
为探索可用来开发牛流行热病毒(bovine ephemeral fever virus,BEFV)疫苗和诊断试剂的候选基因,本研究针对BEFV糖蛋白(G)基因设计了2对特异性引物,用PCR方法扩增基因片段,PCR产物经XhoⅠ和NdeⅠ双酶切后亚克隆到表达载体pET-30上,将鉴定正确的重组质粒(480-pET-30、1107-pET-30)转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,培养阳性菌株D600nm值为0.6~1.0,37℃下用1.0mmol/L IPTG诱导表达目的蛋白,将其纯化之后进行SDS-PAGE和Western blotting免疫原性分析。同时,应用间接ELISA、动物免疫试验及交叉反应试验对目的蛋白进行分析。结果表明,首次发现的1 107bp基因片段是分段表达的,具有很好的生物活性和特异性,更适合作为开发疫苗和诊断试剂的候选基因,为今后建立BEFV的血清学诊断方法及疫苗研发提供了理论基础。
译  名:
Prokaryotic Expression and Antigenic Characterization Identification of G Gene for Bovine Ephemeral Fever Virus

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