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Lager酵母中CRISPR-Cas9基因敲除系统的构建

作  者:
李梦琦;张可心;郑飞云;钮成拓;刘春凤;李崎;王金晶
单  位:
江南大学生物工程学院
关键词:
Lager酵母;CRISPR-Cas9;基因敲除;S.pasteurianus
摘  要:
利用CRISPR-Cas9基因编辑技术在Lager型啤酒酵母(Saccharomyces pasteurianus)中建立CRISPRCas9基因敲除系统.将质粒pMY中毕赤酵母基因表达系统中常用GAP启动子替换为酿酒酵母基因表达系统中常用PGK1启动子,增强外源基因表达量.设计酿酒酵母(S. cerevisiae)基因组及真贝酵母(S. eubayanus)基因组中目的基因TRP1小向导RNA.增加向导RNA结构中锤头状核酶和肝炎三角洲病毒核酶结构,提高gRNA转录水平.Lager型啤酒酵母Pilsner中TRP1基因被敲除,成功构建Lager型啤酒酵母中CRISPR-Cas9基因敲除系统.
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