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三七细胞中共超表达FPS、SS对皂苷合成的影响

作  者:
杨延;于龙凤;王绍梅;李卫娜;葛锋
单  位:
滇西科技师范学院;西京学院;昆明理工大学
关键词:
法呢基焦磷酸合酶;鲨烯合酶;三七皂苷;共超表达;
摘  要:
研究三七细胞中共超表达法呢基焦磷酸合酶(farnesyl pyrophasphate synthase,FPS)基因、鲨烯合酶(squalene synthase,SS)基因对三七细胞皂苷合成的影响。利用农杆菌EHA105将pCAMBIA1300S-FPS超表达载体转入已超表达SS的三七细胞内,双抗生素培养及基因组PCR筛选转双基因阳性株系、qRT-PCR测阳性株系中FPS、SS表达量,分光光度法及色谱法分别测总皂苷和单体皂苷量。在4株转FPS、SS细胞中,FPS的相对表达量均比两对照(未转基因细胞和仅转SS细胞)高,最高分别是未转基因对照的3.26倍和仅转SS对照的3.74倍;SS的相对表达量与仅转SS对照相比无显著差异,但均比转基因对照高;总皂苷含量均比两对照高,最高分别是未转基因对照的2.46倍和仅转SS对照的1.73倍;Re、Rh1、Rd和Rg1 单体皂苷量较两对照大多有不同幅度增加。在三七细胞中共超表达FPS、SS,可有效提高细胞中的总皂苷和部分单体皂苷量;此外,与仅超表达SS比较,共超表达FPS、SS能够进一步提高皂苷含量。

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