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Position: Home > Articles > Establishment and Optimization of ISSR-PCR Reaction System for Tilia amurensis Scientia Silvae Sinicae 2006,42 (6) 26-31

紫椴ISSR-PCR反应体系的建立与优化

作  者:
穆立蔷;刘赢男;冯富娟;杨国亭
单  位:
东北林业大学
关键词:
紫椴;ISSR-PCR;正交设计;单因子试验;梯度PCR
摘  要:
分别采用单因子试验和正交设计2种方法对影响紫椴ISSR-PCR反应体系的4个因素(Taq酶,Mg2+,dNTP,引物)在3个水平上进行优化试验。正交设计选用L9(34)方案,采用直观分析法获得影响因素最佳反应水平。单因子试验分别研究各因素对ISSR-PCR反应的影响情况,找出最佳反应水平。2种方法所得影响因素最佳水平存在差异,通过综合比较与分析,最终建立了紫椴ISSR-PCR的最佳反应体系:在20μL的反应体系中,Taq酶1·0U,Mg2+2·0mmol·L-1,dNTP0·20mmol·L-1,引物0·4μmol·L-1,1×PCRbuffer,30ng模板DNA。在此基础上筛选出14个扩增稳定、多态性丰富的ISSR引物,并通过梯度PCR试验,确定引物最佳退火温度。
译  名:
Establishment and Optimization of ISSR-PCR Reaction System for Tilia amurensis

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