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Position: Home > Articles > Establishment of Triple Fluorescent Quantitative PCR for Escherichia coli,Klebsiella pneumoniae and Acinetobacter in Minks China Animal Health Inspection 2017 (2) 96-100

水貂中大肠杆菌、肺炎克雷伯氏菌和不动杆菌三重荧光PCR方法的建立

作  者:
王贵升;尹斐斐;田夫林;王金宝
单  位:
威海市动物疫病预防控制中心;山东大学生命科学学院;山东省动物疫病预防与控制中心
关键词:
大肠杆菌;肺炎克雷伯氏菌;不动杆菌;荧光定量PCR
摘  要:
依据Gen Bank中大肠杆菌、肺炎克雷伯氏菌和不动杆菌的部分已知序列,选取大肠杆菌的uid A基因、肺炎克雷伯氏菌的khe基因和不动杆菌的sec E基因,利用Primer Premier 5设计引物,选出扩增序列的3对引物及相应的Taqman探针,uidA、khe、secE探针5'端分别标记FAM、HEX、CY5荧光发射基因,3'端标记BHQ1淬灭荧光基因。通过优化反应条件,建立一种同时检测大肠杆菌、肺炎克雷伯氏菌和不动杆菌的诊断方法。特异性和敏感性试验显示,该方法能特异地检测大肠杆菌、肺炎克雷伯氏菌和不动杆菌,其最低检测限分别为2×10~(-1) CFU/μL、9.2×10~(-1) CFU/μL和4.3×10~(-1) CFU/μL。整个检测扩增在2小时内完成。该结果表明本试验所建立的三重荧光定量PCR方法的灵敏度、重复性及特异性均较好,可用于同时快速检测三种病原菌。
译  名:
Establishment of Triple Fluorescent Quantitative PCR for Escherichia coli,Klebsiella pneumoniae and Acinetobacter in Minks

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