随着生物技术的迅猛发展，除草剂抗性突变体的获得不再只能依赖自然突变，而是可以通过人工诱变的方式获得所期望的抗性突变体。人工诱变即通过对作物的花粉、小孢子、种子等组织或器官进行诱变处理，之后在加有特定除草剂有效成分的培养基中进行筛选，从而获得抗性种质^[11]。

由于ALS抑制类除草剂抗性的获得主要是依靠ALS基因突变，故人工诱变在创制抗ALS抑制类除草剂油菜种质上应用最为广泛。常见的诱变方法有：小孢子化学诱变技术（ENU）、X射线诱变、EMS诱变等。加拿大Swanson等人利用小孢子化学诱变技术得到了2株具有咪唑啉酮类除草剂抗性的油菜突变体PM1和PM2，PM1的抗性突变位点为BnALS1的Ser653Asp，PM2的抗性突变位点是BnALS3的Trp574Leu，PM2的抗性水平高于PM1^[59,63]。国外已商业化的抗咪唑啉酮类油菜Clearfield都是由PM1、PM2转育而成^[64]。还有许多通过诱变获得ALS抑制类除草剂抗性的油菜突变种质的案例：采用X射线诱变小孢子获得了耐苯达松（bentazone）的再生植株；通过N-乙基-N-亚硝基脲处理获得了能够咪唑啉酮的突变体；在小孢子培养基中加入绿磺隆获得耐绿磺隆的突变体^[65]。Tonnemaker等人通过EMS诱变获得了抗DPX－G8311（5氯磺隆∶1甲磺隆的混合除草剂）的油菜种质^[66]。EMS诱变和定向选育技术相结合是国内最常用的创制抗ALS类除草剂油菜种质的方法之一。2010年，浦惠明等人利用EMS诱变油菜N131种子，结合多年定向选育成功创制了具有磺酰脲类除草剂抗性的油菜突变体种质DS3，其在12倍推荐使用浓度的除草剂浓度处理下仍无明显药害，通过测序分析，发现DS3发生了ALS1 Pro182Leu、ALS3 Trp556Leu两处突变^[67]。2013年，其团队再次利用EMS诱变和定向选育技术，获得了新的抗磺酰脲类除草剂油菜突变体M342。在除草剂的推荐使用浓度处理下，M342无任何药害症状。进一步克隆获得了M342的抗性基因BnALS3R，其突变位点是Trp556Leu^[68]。曲高平等人从甘蓝型油菜中双9号的EMS突变群体中筛选得到了3株获得苯磺隆抗性的突变体^[69]。2015年，Li等人用EMS溶液对华双5号油菜进行诱变处理，在其突变后代群体中筛选出抗磺酰脲类除草剂的油菜种质M45，测序表明其突变位点为BnALS3的Pro197Ser/Leu^[70]（见表4）。

除了获得ALS抑制类除草剂抗性，也可通过人工诱变获得其他除草剂抗性油菜种质。如2008年，李莉等人利用⁶⁰Co-γ射线辐照湘油15油菜种子，用含不同浓度草铵膦的培养基筛选抗草铵膦突变体，最终获得8株抗草铵膦油菜苗^[71]。