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当前位置: 首页 > 文章 > 古樟ISSR扩增条件的优化 北方园艺 2013 (7) 116-120
Position: Home > Articles > Optimization of ISSR Amplification Conditions in Ancient Camphor-trees Northern Horticulture 2013 (7) 116-120

古樟ISSR扩增条件的优化

作  者：
黄萌;陈尚钘;杨光耀;王宗德;季春峰
单  位：
江西农业大学园林与艺术学院
关键词：
古樟;ISSR;反应条件;优化
摘  要：
采用改良CTAB法提取古樟叶片基因组DNA。利用单因素试验设计,对反应体系中退火温度、模板DNA含量、Mg2+浓度、dNTP浓度、引物浓度、Taq DNA聚合酶用量、去离子甲酰胺等7种因素不同梯度对扩增结果的影响进行了比较分析。结果表明:古樟ISSR-PCR最佳反应体系为,在20μL PCR反应体积中,含50ng DNA模板,2.5mmol/L MgCl2,0.20mmol/LdNTPS,1UTaq DNA聚合酶,0.5μmol/L引物浓度,2%去离子甲酰胺。该反应体系的建立为今后利用ISSR分子技术对古樟的遗传多样性分析提供了技术支撑。
译  名：
Optimization of ISSR Amplification Conditions in Ancient Camphor-trees
作  者：
HUANG Meng1,2,CHEN Shang-xing1,2,YANG Guang-yao1,2,WANG Zong-de1,2,JI Chun-feng1,2(1.College of Landscape and Art,Jiangxi Agricultural University,Nanchang,Jiangxi 330045;2.Jiangxi Provincial Key Laboratory for Bamboo Germplasm Resources and Applications,Jiangxi Agricultural University,Nanchang,Jiangxi 330045)
关键词：
ancient camphor-trees;ISSR;reaction condition;optimization
摘  要：
The genomic DNA of ancient camphor-trees was extracted from leaves by improved CTAB method.With the design of single factor experiment method,the influences of seven factors including Mg2+,dNTP,DNA content in the template,Taq DNA polymerase,amounts of primer,deionized formamide,and annealing temperature on PCR amplification were analyzed.The results showed that the best ISSR-PCR reaction system of ancient camphor-trees was as follows:50 ng DNA template,2.5 mmol/L MgCl2,0.20 mmol/L dNTPS,1.0 U Taq polymerase,0.5 μmol/L primer and 2% formamide deionized in 20 μL reaction volume.The results would lay a technology foundation for further study of the genetic diversity of ancient camphor-trees with ISSR molecular marking.

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