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Position: Home > Articles > Cloning and Prokaryotic Expression of a clip-type Serine Protease Gene from Mythimna separate Acta Agriculturae Boreali-Sinica 2022,37 (1) 195-201

黏虫clip型丝氨酸蛋白酶基因的克隆及原核表达

作  者:
连凯琪;纪爽;周玲玲;时志琪;王飞;张元臣
单  位:
安阳工学院生物与食品工程学院
关键词:
黏虫;丝氨酸蛋白酶;基因克隆;序列分析;原核表达
摘  要:
为了克隆黏虫丝氨酸蛋白酶的全基因序列,并进行原核表达,以黏虫为研究对象,利用RT-PCR扩增丝氨酸蛋白酶的部分基因,进而通过RACE技术,得到丝氨酸蛋白酶全基因,通过Blast等软件对获得基因序列和推导的蛋白质序列进行分析,并利用大肠杆菌表达系统对其进行表达.结果表明,成功克隆黏虫丝氨酸蛋白酶全基因,将其命名为MsPG,序列全长2010 bp,开放阅读框为1593 bp,编码530个氨基酸,蛋白质分子质量为67.6 ku,等电点为7.63,且具有含6个半胱氨酸的clip结构域,推测其为clip型丝氨酸蛋白酶.MsPG氨基酸序列与其他鳞翅目昆虫序列一致性在70.00% ~91.92%,其中与烟芽夜蛾(GenBank登录号:PCG78401.1)序列一致性最高,达到91.92%.成功构建重组质粒pET30a(+)-MsPG,其在大肠杆菌原核表达系统中0.1 mmol/L IPTG诱导下的最佳表达温度是25℃.综上,黏虫丝氨酸蛋白酶MsPG具有丝氨酸蛋白酶家族保守的功能位点,且能够在体外进行原核表达.
译  名:
Cloning and Prokaryotic Expression of a clip-type Serine Protease Gene from Mythimna separate

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