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Position: Home > Articles > THE CONDITION OPTIMIZATION OF ISSR-PCR AMPLIFICATION IN COELOMACTRA ANTIQUATES Transactions of Oceanology and Limnology 2008 (1) 46-53

西施舌ISSR-PCR扩增条件优化

作  者：
张波;孟学平;陈建安
单  位：
淮海工学院海洋学院江苏省海洋生物技术重点建设实验室
关键词：
西施舌;ISSR;条件优化
摘  要：
采用CTAB裂解、酚氯仿抽提法,提取了连云港、长乐、北海、胶南等地的西施舌基因组DNA,并从10条ISSR引物中筛选出了能够显示西施舌种群遗传差异的引物835和847,对模板DNA浓度、镁离子浓度、dNTP浓度、引物浓度和Taq酶浓度等条件进行了优化,初步筛选出适于西施舌ISSR分析的最佳反应体系:在25μL体系中,加模板38ng,10×Buffer 2.5μL,镁离子浓度为3.5mmol/L,引物浓度为0.8μmol/L,dNTP为0.3μl(10mmol/L),Taq DiNA聚合酶2U,退火温度为47.2℃。
译  名：
THE CONDITION OPTIMIZATION OF ISSR-PCR AMPLIFICATION IN COELOMACTRA ANTIQUATES
作  者：
ZHANG Bo MENG Xueping~* CHEN Jianan (Jiangsu Key Laboratory of Marine Biotechnology,Marine School,Huaihai Institute of Technology,Lianyungang,222005)
关键词：
Coelomactra antiquate;;ISSR;;condition optimization
摘  要：
With the method of hydroxybenzene-chloroform,the Coelomactra antiquates' ge- nome DNA were extracted.All Coelomactra antiquatae were collected from Lianyungang, Changle,Beihai,Jiaonan.Two primers (847 and 835) were screened out which could give many differences in Coelomactra antiquatas' heredity.Using the genome DNA as template, for the best condition of PCR of the concentrations of genome DNA,Mg~(2+),dNTP,primer and Taq polymerase were screened.At last,the best reaction system was obtained:a 25μl volume reaction mixture composed of 38ng genome DNA,2.5μl 10×Buffer,3.5mmol/L Mg~(2+),8μmol/L primer,0.3μl dNTP (10 mmol/L each),2U Taq polymerase,and ddH_2O to 25μl.And annealing for 45s was at 47.2℃.

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