集胞藻PCC6803中N-乙酰鸟氨酸转氨酶的生化表征及结构分析
作 者：
白福美;李至敏;王小琴;胡紫微;鲍玲玲;李志敏
单 位：
江西农业大学生物科学与工程学院;江西农业大学理学院
关键词：
N-乙酰鸟氨酸转氨酶;原核表达;生化表征;结构分析;集胞藻PCC6803;
摘 要：
旨在对集胞藻PCC6803中slr1022基因编码的N-乙酰鸟氨酸转氨酶进行生化表征及结构分析,为进一步研究该酶的催化功能及机制奠定理论基础。以集胞藻PCC6803基因组为模板,通过PCR扩增获得slr1022基因,将其连接到表达载体pET-28a上,转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态。经IPTG诱导,Ni-NTA亲和层析纯化后获得重组Slr1022蛋白,然后通过紫外分光光度法对Slr1022蛋白的催化功能进行表征,并运用生物信息学软件对该蛋白进行结构分析。成功构建pET28a-slr1022重组表达质粒,并诱导表达重组Slr1022蛋白,SDS-PAGE电泳鉴定该蛋白分子量约为50 kD,与理论大小相符。Slr1022蛋白与底物N-乙酰鸟氨酸的结合常数Km和最大反应速度Vmax分别是0.12 mmol/L和0.60 μmol/（L·s）,并且Slr1022蛋白与另一底物α-酮戊二酸的Km和Vmax分别是0.039 mmol/L和0.65 μmol/（L·s）。Slr1022蛋白在pH 8.5时催化活性最强。Slr1022蛋白和其他来源的N-乙酰鸟氨酸转氨酶氨基酸序列有一定的同源性,而且活性位点的氨基酸残基高度保守。成功克隆并表达纯化出Slr1022蛋白,酶学性质和生物信息学研究表明Slr1022蛋白为N-乙酰鸟氨酸转氨酶。
